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CAS:70363-83-6,DiBAC4(3)荧光探针

更新时间:2019-04-26

简要描述:

DiBAC4(3)是一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料,它本身无荧光,当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。CAS:70363-83-6,DiBAC4(3)荧光探针

CAS:70363-83-6,DiBAC4(3)荧光探针

CAS70363-83-6DiBAC4(3),细胞膜电位荧光探针

CAS#70363-83-6

英文名:Bis(1,3-dibutylbarbituric acid)trimethine oxonol

分子式:C27H39N4O6

分子量:515.62

结构式:

性质:

1. 外观:红色粉末

2. 纯度:≥98%

3. 产品描述:

DiBAC4(3)是一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料,它本身无荧光,当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。DiBAC4(3)进入细胞,细胞内荧光强度增加,即膜电位增加表示细胞去极化;反之,细胞内荧光强度降低即膜电位降低表示细胞超极化。

4. 溶解及使用方法:

可以使用DMSO、无水乙醇和纯水溶解,用DMSO溶解成10mM的母液储存,如果低浓度也可以满足要求也可用纯水溶解。

I. 用荧光显微镜测定膜电位的方法

1)试剂

·DiBAC4(3)

·Dulbecco’s MEM (DMEM)

·FBS (fetal bovine serum)

2)方法

1) 将消化好的细胞移至DMEM中。

2) 加入FBS,控制浓度范围在:215%

3) 加入DiBAC4(3),控制浓度范围在:15 µmol/L

4) 用荧光显微镜观察刺激后荧光强度的变化。[Ar激光(488 nm) 的激光共聚焦显微镜],由于DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变,所以必须在37的条件下测定。由于细胞膜的电位会变化,可以观察细胞质内的荧光强度变化。 

II. 用酶标仪测定膜电位的方法

1)试剂

·DiBAC4(3)

检测用缓冲液 (pH7.4; 20 mmol/L HEPES, 120 mmol/L NaCl, 2 mmol/L KCl, 2 mmol/L CaCl2, 1 mmol/L MgCl2,5 mmol/L glucose)

2)方法

1) 培养细胞:在微孔板中培养细胞

2) 清洗细胞:用含5 µmol/L DiBAC4(3) 的检测用缓冲液200 µL,清洗微孔板中培养的细胞2

3) 染色:在孔板中加入180 µL5 µmol/L DiBAC4(3) 的检测用缓冲液,在5%CO237培养箱中孵育30分钟。

4) 测定:用荧光酶标仪观察刺激后荧光强度的变化。由于DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变,所以必须在37的条件下测定,加入20 µLDiBAC4(3) 的检测用缓冲液,每隔30秒测定1次荧光变化。 

III. 膜电位的标准曲线

1)原理

膜电位变化时色素的分布也随之变化,所以荧光和吸收也会变化。这种变化程度取决于色素的分子数和细胞数的比率、色素的浓度以及细胞的种类。膜电位的标准曲线是通过用电极直接测定目的细胞的膜电位,在该电位所测得的荧光和吸收强度而制得的。 

2)试剂

·DiBAC4(3)

·Eagle-Dulbecco medium

·PBS

3)方法

1) Eagle-Dulbecco medium培养细胞。

2) PBS中的细胞在37CO2培养箱中孵育3060分钟,然后改变孵育时间,制备不一样的CO2浓度的样品。

3) 加入DiBAC4(3),终浓度为2 µmol/L

4) 20分钟后,在517 nm测定各个浓度的荧光强度,并用电极直接测定此时的电位差。

5) 用荧光强度和对应的电位差来制作标准曲线。 

4)其他方法

有钾扩散电位和荧光或吸收强度比较的方法。缬氨霉素引起钾扩散电位,钾扩散电位 (V) 是按照Nernst 方程计算如下:

V= -RTF log[K+]in[K+]out = -59 log[K+]in[K+]out (mV) 

所以在缬氨霉素存在时,通过改变细胞外钾离子浓度和细胞内钾离子浓度,计算扩散电位,测定各个电位的荧光或吸收强度,比较后可以得到标准曲线。

储存条件:-20干燥避光保存,有效期一年。

供应商:杭州新乔生物科技有限公司

CAS:70363-83-6,DiBAC4(3)荧光探针

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