Cy5-NHS（Cyanine5 NHS ester chloride，CAS：1032678-42-4）详情介绍

Cy5-NHS（Cyanine5 NHS ester chloride，CAS：1032678-42-4）

 别名：Cy5 活性酯、Cy5-SE，非磺化脂溶性花菁 5 NHS 酯（氯化盐），远红光胺反应型荧光标记染料，仅用于科研实验

 一、基础理化与光谱参数

- 分子式：C36H42ClN3O4

- 分子量：616.19

- 外观：深蓝色 / 红棕色固体粉末

- 光谱：ex=646nm，em=662 nm；摩尔消光系数250000M-1cm-)；荧光量子产率≈0.2；pH 不敏感（pH4–10 稳定），适配 633/647 nm 激光（共聚焦、流式标配激光）

- 溶解性：脂溶性，几乎不溶于纯水；易溶于 DMSO、DMF、乙腈；水相标记体系需要加入少量有机共溶剂；若蛋白不耐有机溶剂，改用Sulfo-Cy5-NHS（磺化水溶性版本）

- 反应基团：NHS 琥珀酰亚胺活性酯，选择性与伯氨基（-NH₂）反应，生成稳定酰胺键；NHS 在水溶液中会缓慢水解，标记反应一般控制弱碱性（pH 8.0–8.5）。

- 储存：-20 ℃，干燥避光密封；固体长期保存

 二、标记原理

NHS 活性酯在弱碱条件下，和生物大分子表面伯胺（赖氨酸侧链氨基、氨基修饰核酸 / 多肽）共价偶联，把 Cy5 远红光荧光团稳定接在目标分子上。

天然 DNA/RNA 无游离伯胺，必须预先氨基修饰，才能被 Cy5-NHS 标记；蛋白、抗体、多肽自带赖氨酸氨基，可直接标记

光谱对标：和 Alexa Fluor 647、DyLight649 光谱非常接近，可作为替代染料使用。

 三、主要应用

1. 抗体、重组蛋白标记

常用场景：标记一抗 / 二抗，用于免疫荧光 IF、免疫印迹 WB、免疫组化 IHC。远红光区域细胞 / 组织自发荧光低，信噪比显著优于 FITC、Cy3。

2.多肽、氨基修饰寡核苷酸标记

制备荧光核酸探针，用于FISH 荧光原位杂交、qPCR 探针、分子信标、miRNA 检测；多肽荧光示踪。

3.流式细胞术、多色流式

和 FITC、Cy3 等组合做多色染色，Cy5 通道对应 640nm 激光器，用于免疫细胞分群（CD4/CD8 等）。

4. 荧光显微成像（共聚焦、宽场荧光）

细胞内蛋白定位、细胞器标记；远红光穿透能力更强，适合较厚组织切片成像。

5. 纳米生物探针 / 药物载体标记

标记氨基修饰脂质体、聚合物纳米粒、二氧化硅纳米颗粒等，用于体外示踪、小动物活体荧光成像（IVIS），追踪纳米载体体内分布与富集（注意：脂溶性 Cy5 标记纳米材料，要评估染料泄漏与聚集）

6. 生物芯片、荧光凝胶电泳

蛋白芯片、核酸芯片荧光读 out；蛋白电泳凝胶直接荧光显色，Cy5 信号肉眼可见。