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谈谈蛋白交联剂的使用方法及分类
发布时间:2019-09-26   点击次数:19次
  蛋白交联剂是一类小分子化合物,具有2个或者更多的针对特殊基团(-NH2、-COOH、-HS等)的反应性末端,可以和2个或者更多的分子分别偶联,从而使这些分子结合在一起。70年代时人们普遍使用戊二醛作为蛋白质交联剂连接抗体和指示剂(如酶类),但其缺点是由于交联基团是随机的,容易形成杂乱的多聚体。80年代,更具选择特异性的交联剂,例如NHS(针对-COOH)和马来酰亚胺(针对-HS)在生命科学研究中得到了更为广泛的应用。巧妙地运用交联剂可以在蛋白质相互作用研究,免疫学,癌症治疗等领域取得意想之外的收获。截至2010年,市面常用的蛋白质交联剂大约有一百多种。
  蛋白交联剂的使用方法:首先将待交联的蛋白质A与交联剂在一定条件下反应,得到的蛋白质A-交联剂中间体,然后移除多余的交联剂,再加入欲交联的蛋白质B。产物中可能会形成多聚体,这一副产物通过调节反应条件来控制。分成两部反应的目的在于减少分子内交联以及形成蛋白质多聚物。另外,选择异源交联剂也可以减少多聚物的产生。
  蛋白交联剂分为三大类:同源交联剂,异源交联剂,光反应交联剂。
  同源交联剂:具有两个相同活化反应基团。应用:一步反应,分子内交联,多聚反应,稳定四级结构
  异源交联剂:具有两个不同活化反应基团。应用:两步反应交联,可减少聚集和自身交联。
  光反应交联剂:反应原则:首先交联不稳定的热反应活性基团(与第—种蛋白质),然后UV交联,将第—种蛋白质交联到第二种蛋白质的N-H,C-H上。特点:交联非特异性,产率低。
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