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对于蛋白交联剂你真的有去认真的了解过吗?
发布时间:2020-05-23   点击次数:112次
   蛋白交联剂是一类小分子化合物,具有2个或者更多的针对特殊基团(-NH2、-COOH、-HS等)的反应性末端,可以和2个或者更多的分子分别偶联,从而使这些分子结合在一起。70年代时人们普遍使用戊二醛作为蛋白质交联剂连接抗体和指示剂(如酶类),但其缺点是由于交联基团是随机的,容易形成杂乱的多聚体。80年代,更具选择特异性的交联剂,例如NHS(针对-COOH)和马来酰亚胺(针对-HS)在生命科学研究中得到了更为广泛的应用。巧妙地运用交联剂可以在蛋白质相互作用研究,免疫学,癌症治疗等领域取得意想之外的收获。截至2010年,市面常用的蛋白质交联剂大约有一百多种。
  蛋白交联的操作流程:首先将待交联的蛋白质A与交联剂在一定条件下反应,得到的蛋白质A-交联剂中间体,然后移除多余的交联剂,再加入欲交联的蛋白质B。产物中可能会形成多聚体,这一副产物通过调节反应条件来控制。分成两部反应的目的在于减少分子内交联以及形成蛋白质多聚物。另外,选择异源交联剂也可以减少多聚物的产生。
  大多数蛋白质-蛋白质结合相互作用是瞬时的,通过交联方法可以稳定或永久连接相互作用复合物中的成分,从而有助于鉴别这些瞬时接触。一旦相互作用的成分被共价偶联,可以使用其他步骤(例如细胞裂解,亲和纯化和电泳)来制备分析样品,同时可维持最初的相互作用复合物。
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